流式细胞仪：检测细胞周期实验指南
编辑：Simone
2025-02-04 20:25:22
594 阅读
通过核酸染料PI标记DNA，并由流式细胞仪进行分析，可得到细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%，S%及G2/M/%，由此可以了解细胞的增殖能力，在抗肿瘤研究中，S期细胞比率通常作为判断肿瘤增殖状态的指标。
收集6孔板中的培养液于离心管中，1000rpm/min,离心10分钟，真空泵抽走上清液。
加入含EDTA的胰酶进行消化，待消化ok后，加入含10%FBS的DMEM终止消化，轻轻吹打细胞，将细胞悬液收集到离心管中。1000rpm/min,离心10分钟，真空泵抽走上清液。
逐滴加入5ml或更多预冷的70-80%的乙醇，涡旋以混匀细胞， 4°C避光过夜（>18小时）。若长期保存，将固定的细胞放于-20°C.
1000-1500rpm/min, 离心细胞10分钟，弃上清。之后清洗细胞2次以去除所有的乙醇。注：第一次用1x PBS，第二次用染色液。
5. 细胞染色：每管样本需10^6细胞。具体操作如下：
A. 对于PI/RNase 染色，将细胞重悬于0.5 mL PI/RNase 染色液。
B 对于7-AAD染色，将细胞重悬于0.1 mL 染色液，同时加入20 μL7-AAD染色液。
室温避光孵育15分钟。
分析前4°C避光保存样本，1小时之内上流式细胞仪检测。
版权声明：本站【趣百科】文章素材来源于网络或者用户投稿，未经许可不得用于商用，如转载保留本文链接：https://www.qubaik.com/article/129202.html
